PCR實驗室（shì）建（jiàn）設所（suǒ）需資料
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1周前
4月26日，國家衛健委（wěi）舉辦全國視頻會議，明確提出“所有縣區級以上疾控機構、二級以上綜合醫院（yuàn）要抓緊進行改造，在短時（shí）間內形成核酸檢測能力”。
各地的公立（lì）機構檢測能力不（bú）能滿足需（xū）求隻是暫時的，獨立醫學實（shí）驗室在充實（shí）檢測力量（liàng）的同時，發揮自己豐富的檢驗管理運營（yíng）理念，以及區域化覆蓋的經驗優勢，融入到“國家隊”核酸（suān）檢測（cè）能力的建設（shè）中，順勢而為，乘勢而上。
隨著各地都在建立PCR實驗室，本文從硬件基礎的角度，梳理了PCR實驗室建（jiàn）設的幾個關鍵點，獨立醫（yī）學實驗室可以運（yùn）用豐富的運營經驗，進行建設指（zhǐ）導、人員梯隊建立、質控體係搭建、區域化服務支持（chí）等。
如何建設PCR實驗室
與PCR實（shí）驗室建設相關的指導文件主要有四份：
《醫療機構管理條例》
《醫療機（jī）構臨床實驗室管理辦法》
《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》
《醫療機構臨床基因擴增（zēng）實（shí）驗室管理辦法》
要求臨床PCR實驗室，不但（dàn）在（zài）實驗室設置及儀器設備等硬（yìng）件上要（yào）滿足（zú）開展臨床檢驗的（de）條件，而且要求實驗室（shì）在（zài）日常工作要有文件化的工作程序。
下麵就在（zài）PCR實（shí）驗室建設（shè）過程中的幾個關鍵控製（zhì）點進行闡述:
01
建（jiàn）立PCR實驗室質量管（guǎn）理（lǐ）體係
根據實驗室的具體情況編寫質（zhì）量體係文件，《質（zhì）量（liàng）手冊》、《程序文件》、《作業指導書》，並保證管理體係運行有效。
管理體係的特點是應有明確的目的、規範（fàn）的（de）管理、有效的製約、高效的機製、能自（zì）我發展的整（zhěng）體。
建立完善的SOP文件，對完成各項質量活動的方法作出規定，每個SOP都應對一個或一組相互關係的活動進行描（miáo）述。
每個SOP文件應說明該項質量各環（huán）節的輸入、轉換和輸出所需的文件、物資、人（rén）員、記（jì）錄以及它（tā）們與（yǔ）有（yǒu）關活動的接口關係。
明（míng）確每個環節轉換過程中各項因素的要求，即由誰做、做什麽、做到什麽程序、達到什麽要求，如何控製、形成（chéng）什麽記錄和報告，以及相應（yīng）的審（shěn）批手續。
規定在質量活動中需要注（zhù）意的例（lì）外或特殊情（qíng）況的糾正措施。SOP應簡練、明確（què）和易懂並（bìng）且工作（zuò）人員熟練掌握和嚴格遵守。
02
PCR實（shí）驗室的相關設置
要完成一組PCR實驗（yàn），通常需要經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增和產物分析4個實（shí）驗過程。
這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置（zhì），組（zǔ）成一個獨立的PCR實（shí）驗區。標準的PCR實驗區（qū）包括（kuò）:試劑準備區、標（biāo）本製備區、擴增區、產物分析區、各區配套的緩衝區及公（gōng）共走廊。
PCR實驗室（shì）整體平麵布局
某醫院PCR實驗室平麵（miàn）布（bù）局如圖1所示，整個區域（yù）有一個公用走廊，每個獨立實驗區設有專門的緩（huǎn）衝區。通過（guò）壓差控製（zhì），使整個PCR實（shí）驗過程中試劑和標本免受（shòu）氣溶膠的汙染，並且（qiě）降低擴增產物對人（rén）員和環境的汙染。
圖表1、某醫院PCR實驗室平（píng）麵圖
試（shì）劑準備區（qū）
該實驗區主要進行的操作為（wéi）貯存試劑的製（zhì）備、試劑的分裝和主反應混合液的製備。
試（shì）劑（jì）和用於標（biāo）本製作的材料應直接運送至（zhì）該區，不得經過其他區域。試劑原材料（liào）必須貯存在本（běn）區內，並在本區內製備成所需（xū）的貯存試劑。
試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們（men）計算在內。
房間的麵積宜（yí）控製在15m2~20m2。本區的（de）壓力梯度要（yào）求為:相對（duì）正壓狀態，以防止外界（jiè）含（hán）核酸氣（qì）溶膠（jiāo）的空氣進入，造成汙染。
標本（běn）製備區
該區域主要進（jìn）行（háng）的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加（jiā）入至擴增反應（yīng）管（guǎn）和測定RNA時cDNA的合（hé）成。
標本製備區配（pèi）備有2~8°C冰箱和（hé）-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內。在標本製備區，還（hái）需要配備生物安全櫃，用於（yú）進行提取核酸的操作。
為（wéi）避免提取的核（hé）酸（suān）在櫃內反複循環，造成標本之間的交叉汙染，出現假陽性（xìng）結果，該區域配備的生物（wù）安全櫃必須是B2型的。生物安全櫃工作區垂直氣流全（quán）部來自實驗室，排風經過高效（xiào）過濾（lǜ）器(www.gdlingjie.net)過濾後直接排至室外，不允許回到安全櫃和（hé）實驗室（shì）中。
根據經驗，如果實（shí）驗（yàn）室內（nèi）配備生物安全櫃，每配備（bèi）一台，實（shí）驗室的麵積增加10m2;標本製備區（qū）的麵積宜在25m2~30m2之間（jiān）。本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區（qū）域為正壓，以避免從鄰近（jìn）區進入本區的氣溶膠汙染。
擴增室
該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已製備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本製備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯（zhù）存和製備（bèi）區)製備成（chéng）反應混合液等也可在本（běn）區內進行。
在巢式PCR測定中（zhōng），通常在第一輪擴增後必（bì）須打開反應管，因此巢式擴增有較高的汙染危險性，第二次加樣（yàng）必須（xū）在本區（qū）內進行。
擴（kuò）增（zēng）室主要配備PCR實驗（yàn）室的核心儀（yí）器PCR儀，本文實（shí）例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。
在實驗室建（jiàn）造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區麵積控製在15m2~20m2。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰（lín）近區域為負壓，以避（bì）免氣溶膠（jiāo）從本區漏出。為避免（miǎn）氣（qì）溶膠所致的汙染，應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超淨台內進行（háng）。建議采（cǎi）用5~10Pa壓差，在控製上比較容易實現。
產物分析區（qū）
該（gāi）區域主要進行的操作（zuò）為擴增片段（duàn）的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區域可（kě）不設。
在室內配備通風櫥，保證房間內的相對負壓，空氣從室外流向室內。該區麵（miàn）積控製在15m²~20m²。
本（běn）區是最主要的擴增產（chǎn）物（wù）汙染來源，因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓，以（yǐ）避免擴（kuò）增產物從本區擴散至其它區域。建議采用5~10Pa壓（yā）差，在（zài）控（kòng）製上比較容易實現。
03
正負壓區域緩衝室（shì）的設置
根（gēn）據壓力梯（tī）度的要求，試劑配製室（shì）和樣品處理室為相對正壓（yā），擴增室（shì）和產物分析室為相對負壓，要求正壓的區域和（hé）要求負壓的區域的（de）緩（huǎn）衝室內的（de）壓（yā）力設計（jì）大不相同。
正壓緩衝室符合一般正壓潔淨室的緩衝原（yuán）則，主要是防止室外環境空氣中的氣溶膠進入室內。正壓緩衝室的布置如圖2所示（shì）。
圖表2、正（zhèng）壓緩衝室的布置圖
負壓（yā）緩衝室則是要求緩衝室對核酸擴增室及產物分析區（qū）保持正壓（yā），對緩衝室外也保持正壓(主要是滿足室內淨化需要（yào），如室內無潔淨要求，此處可（kě）以為0壓)。負壓緩衝室的布（bù）置如（rú）圖3所示。
圖表3、負壓緩衝室的（de）布置圖
04
客服（fú）1